培育基的滅菌及運(yùn)用

1.每次配置時(shí)，要留意其消費(fèi)日期能否在保質(zhì)期內(nèi)，檢查其開瓶日期及瓶口密封性，保證其未蛻變，并且未吸潮。

2.培育基配置時(shí)，稱量要準(zhǔn)確，包括鹽水的分裝要準(zhǔn)確。

3.一定要保證現(xiàn)配制現(xiàn)滅菌，未滅菌的配好培育基不能長時(shí)間放置，更不可隔夜。

4.滅菌時(shí)要保證恒溫、恒壓，同時(shí)要保證有效滅菌時(shí)間。

5.滅菌過的培育基要冰箱保管，可保管一周，普通不超越 3 天。而且要遵照“先入先出”準(zhǔn)繩，先配制的要先運(yùn)用。

6.在運(yùn)用時(shí)，要依據(jù)當(dāng)班次的運(yùn)用量，用水浴鍋先將培育基溶化為液態(tài)，然后及時(shí)調(diào)低水域溫度（先化好的可從水域取出，放在水浴鍋鍋蓋上）待用，千萬不可長時(shí)間使培育基處于高溫形狀。

7.做產(chǎn)品微生物檢測時(shí)，傾倒培育基溫度在 45℃左右，不可過燙，防止將菌燙死；也不可過涼，化好的培育基又結(jié)塊凝結(jié)，方便于觀察結(jié)果。

8.每瓶培育基均要做空白。

9.盡量集中做樣，防止頻繁翻開同一瓶培育基瓶塞，增大培育基的污染幾率，出現(xiàn)誤差結(jié)果。

10.培育基剩余過少時(shí)，可先將其傾倒成空白用板。

做樣環(huán)境的維持

一、大環(huán)境（房間）

1.做樣時(shí)，窗戶和空調(diào)要封鎖，或用酒精對房間停止噴霧消毒，防止房間內(nèi)空氣流通影響超凈臺外部環(huán)境（*好在有通排風(fēng)系統(tǒng)的恒溫恒濕無菌間停止操作）。

2.假設(shè)在原來的原料微生物檢測室停止做樣，要活期開啟紫外燈，對房間停止殺菌。

二、小環(huán)境（超凈臺）

1.活期清潔初效過濾器，要及時(shí)改換。

2.做樣前，將超凈臺外部停止清潔，用 75%酒精停止擦拭消毒，并提早半小時(shí)將超凈臺紫外燈翻開，對超凈臺外部環(huán)境停止殺菌。

3.關(guān)紫外燈，開風(fēng)機(jī)，調(diào)整適宜進(jìn)風(fēng)量，風(fēng)量不可過低。

4.每次做樣后，要對超凈臺外部停止清算、清潔，并用 75%酒精停止擦拭消毒。

5.紫外燈依據(jù)其運(yùn)用壽命要及時(shí)改換。

6.做樣同時(shí)，要做上相應(yīng)菌落檢測的環(huán)境空白。

7.做樣區(qū)域的選擇：

①普通在距離超凈臺外沿的 1/3-2/3 區(qū)域停止無菌操作；

②要在酒精燈火焰的外焰維護(hù)區(qū)域停止操作。

工用具的潔凈度

1.玻璃器皿：采用干熱滅菌方式停止滅菌。

2.做樣用剪刀、勺子等物品要做到做樣公用，不可與其它操作用具混用，運(yùn)用時(shí)，先用75%酒精消毒，再采用灼燒方式停止滅菌。

3.接種針（環(huán)）采用灼燒方式停止滅菌，但要留意做樣時(shí)要先將接種針（環(huán)）停止冷卻。

樣品的采集及檢測

一、保證采樣用具的無菌性

1.玻璃器皿：采用干熱滅菌方式停止滅菌，保證恒溫、時(shí)間足夠（但不可時(shí)間過長，招致玻璃器皿易裂紋而報(bào)廢）。

2.取樣筐：運(yùn)用前要用 75%酒精停止噴灑消毒

3.取樣勺、濃奶取樣提子：要保證其清潔消毒，清潔后用 75%酒精停止擦拭消毒。

4.取樣袋：可現(xiàn)用酒精停止擦拭消毒，再在超凈臺用紫外燈照射消毒，（包卸車間要在傳遞窗用紫外燈照射消毒）。

5.電子稱外表用 75%酒精消毒。

二、人員操作

1.保證手部的清洗、消毒：取樣前及做樣前都要先洗手再消毒。

2.取樣要具有代表性（隨機(jī)樣、目的樣、綜合樣）且要標(biāo)示清楚。

3.取樣終了，不可在車間逗留，要及時(shí)將樣品放入超凈臺，對其外表面停止紫外燈照射消毒。

4.在要求的做樣區(qū)域停止操作。

5.做樣前，要用 75%酒精棉球?qū)悠反诓客Ｖ共潦孟荆賳X。

6.往鹽水瓶加樣品時(shí)，要留意勺子或袋子盡量不接觸瓶口。

7.樣品計(jì)量要準(zhǔn)確，稀釋倍數(shù)也要準(zhǔn)確（1mL 吸管不允許將管口敲掉），停止 100 倍稀釋時(shí)，1mL 吸管要伸入鹽水中，不可以將樣品管壁流下去，同時(shí)要防止將管底部捅破。

8.鹽水溫度以 40℃左右為宜，不能過熱，將局部微生物燙死，也不能溫度太低，不能將奶粉溶解完全。

9.停止稀釋時(shí)，要搖勻，保證溶液的均一性。

10.傾倒平皿時(shí)，要留意培育基瓶口不要接觸到平皿；傾倒的培育基要過量，不可以太少，在培育進(jìn)程中干掉，微生物亦死亡，以 15mL 左右為宜。

11.做大腸菌群樣時(shí)，要提早將乳糖膽鹽培育基培育管按需求量備好，放入超凈臺對外表面停止紫外線滅菌。

12.接二步時(shí)，要留意先將接種針（環(huán)）停止冷卻，防止出現(xiàn)接不上菌落的狀況發(fā)作，招致無法判別、確認(rèn)。

13.做樣終了，及時(shí)放入相應(yīng)培育箱停止培育，并清算清潔超凈臺。

微生物的培育

1.在培育進(jìn)程中，要隨時(shí)監(jiān)控培育箱溫度，保證其在適宜的溫度停止培育。

2.要依照《微生物檢驗(yàn)規(guī)范》要求及時(shí)觀察結(jié)果，出現(xiàn)異常，要及時(shí)剖析緣由停止反應(yīng)。

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