到目前為止，已經(jīng)報道有2種非人靈長類動物（恒河猴、食蟹猴）和4種嚙齒類動物（大鼠、小鼠、田鼠、沙鼠），雪貂、家貓以及雞、鴨等禽類可以作為H5N1禽流感病毒動物模型用于實驗研究。低致病性H5N1禽流感病毒可以通過適應建立鼠肺適應株感染小鼠建立小鼠模型。非人靈長類動物通過鼻腔吸入較難感染，通常需要借助輔助器材進行定位感染，動物感染后體征變化不顯著，肺組織出現(xiàn)局灶性病變。

前期研究顯示雪貂的受體分布情況與人極為接近，呼吸氣道長，上下呼吸道分腔明顯是流感病毒研究最為理想的動物模型，缺點是雪貂受物種特異性限制缺乏相應的檢測試劑。小鼠對多種流感病毒敏感，一直被選擇作為流感病毒研究的動物模型，不僅有完備的檢測試劑，還有相應的基因敲除、轉(zhuǎn)基因小鼠可用于機制方面的研究。早期研究曾在多種非人靈長類動物中（非洲綠猴、Pata猴、豬尾猴、食蟹猴）檢測到血清抗體陽性，并推測猴群感染病毒參與了流感大流行。研究發(fā)現(xiàn)非人靈長類動物感染禽流感病毒后的臨床改變、病理變化、抗原分布都與人類存在一定差異，研究結(jié)果顯示其對流感病毒敏感性較雪貂、小鼠低。至今沒有直接證據(jù)表明非人靈長類動物的受體分布情況與人接近。恒河猴中研究局部肺組織損傷機制不僅與巨噬細胞有關(guān)，在研究抗補體機制中還應考慮PAMP的參與，NF-κB 等炎癥信號途徑的作用，這些研究在非人靈長類中受到一定限制，目前小鼠可以提供多方面抗補體機制研究。

受體比較

1) 人呼吸道上皮受體分布情況：α-2，6連接唾液酸糖蛋白受體主要分布在鼻粘膜上皮細胞, α-2，3連接唾液酸糖蛋白受體分布在鼻旁竇、咽、氣管、細支氣管上皮上。在終端呼吸性細支氣管上皮細胞也表達α-2，6連接唾液酸糖蛋白受體。α-2，3連接唾液酸糖蛋白受體出現(xiàn)在呼吸細支氣管與肺泡交界的無纖毛立方細支氣管細胞上，部分肺泡壁細胞表達這種受體，這種細胞為肺泡Ⅱ型細胞。病人感染H5N1禽流感病毒后，病毒主要分布在肺泡Ⅱ型細胞內(nèi)。

2) 雪貂除了氣管中極少數(shù)杯狀細胞既表達α-2，3SA受體又α-2，6SA受體，其上下呼吸道受體分布與人極為相似，小鼠多表達α-2，3SA受體，α-2，6SA受體較少，曾局限的認為小鼠較適合用于α-2，3SA受體結(jié)合的病毒研究，后有研究發(fā)現(xiàn)受體特異性并不影響某些病毒對小鼠的致病力和復制能力。

3)有研究顯示通過體外實驗證實非洲綠猴上皮細胞與人類流感病毒和禽類流感病毒都有較好的結(jié)合能力，與人類上皮細胞的結(jié)合能力接近。缺乏實驗證據(jù)顯示其受體與人類受體分布相似度。

6.2感染途徑比較

1) 小鼠、雪貂通過輕微麻醉后，以吸入式方式感染，感染方式與人極為接近。

2) 恒河猴、綠猴、食蟹猴等需要以環(huán)甲膜穿刺、支氣管鏡定位感染等方式進行感染，感染途徑與自然感染途徑差別較大，感染效果通常會出現(xiàn)肺組織局域性灶狀感染，與吸入性感染方式產(chǎn)生的病變程度、范圍存在一定差別。

感染后癥狀

1) 部分禽流感病毒在猴上皮細胞中復制受限或者發(fā)生不同程度的衰減。例如禽來源的H2N2病毒不能感染猴，H5N1高致病性禽流感病毒需要以高出雪貂感染劑量103倍的劑量感染猴，仍不致死，僅產(chǎn)生一過性體溫升高。

2) 幾乎所有禽流感病毒都能夠在雪貂中成功復制，并產(chǎn)生臨床可觀察的改變，例如體溫升高、體重下降、噴嚏、流涕、精神萎靡甚至死亡。

3)H5N1禽流感病毒感染小鼠后出現(xiàn)嚴重的肺炎，除呼吸道以外還在腦、脾、肝等組織中發(fā)現(xiàn)病毒抗原，并在腦組織中出病理改變，猴感染后在呼吸道以外的組織中未發(fā)現(xiàn)病毒抗原。

CRP基因敲除小鼠和人CRP轉(zhuǎn)基因小鼠在賽業(yè)（蘇州）生物科技有限公司模式動物研究中心完成，該中心具有符合國際標準的動物模型制備相關(guān)完備監(jiān)督管理制度。動物的繁殖及感染模型評估在中國疾控中心動物中心完成，所有操作在SFP級別下遵守二級生物安全管理規(guī)定進行，實驗動物尸體實行無害化處理，對生態(tài)環(huán)境無影響。

1. 小鼠感染后臨床癥狀變化

小鼠感染后呈現(xiàn)顯著的體重下降，動作遲緩，對外界刺激無反應甚至死亡，感染后體征表現(xiàn)見圖1。小鼠感染后第1天開始出現(xiàn)體重下降持續(xù)至全部死亡，體重下降率超過40%，見圖2。小鼠感染后第4天開始死亡，感染后5天迅速內(nèi)全部死亡，見圖1。

2. 小鼠感染后病毒在組織中復制情況

進一步觀察病毒在小鼠各組織中的復制情況，結(jié)果顯示H5N1病毒在肺以外的多個組織中復制，如肝、脾、腎、腸中復制，腦中可以檢測到極微量的病毒復制（見表1）。

3. 小鼠感染后組織病理損傷

小鼠感染5天后處死小鼠，解剖獲取腦組織和肺組織，組織大體檢查發(fā)現(xiàn)肺組織全肺充血，見圖3。在感染后第1天,第3天和第5天分別處死小鼠，取小鼠肺組織進行病理檢查，鏡下觀察發(fā)現(xiàn)肺組織炎癥損傷隨感染天數(shù)迅速加重，具體表現(xiàn)為肺組織呈炎性充血、出血、水腫、壞死、滲出的重度肺炎病理改變見圖4。肺組織、腸組織、腎組織和腦組織進行免疫組化染色，結(jié)果在以上組織中可以觀察到病毒感染的陽性細胞。

4. H5N1禽流感病毒在同籠小鼠中的傳播

設(shè)立H1N1病毒為陽性對照，H5N1病毒感染3只小鼠24小時后與未感染小鼠同籠放置，觀察小鼠癥狀，并分時間點處死小鼠采集樣本測定小鼠測定小鼠感染情況。結(jié)果顯示H5N1病毒在同籠小鼠中不傳播，H1N1病毒在同窩小鼠中傳播（見表2）。與H1N1病毒感染小鼠同籠小鼠中有8/14小鼠被感染，病毒主要分布在呼吸道。

小鼠對多種流感病毒敏感，一直被選擇作為流感病毒研究的動物模型，不僅有完備的檢測試劑，還有相應的基因敲除、轉(zhuǎn)基因小鼠可用于機制方面的研究。小鼠多表達α-2，3SA受體，α-2，6SA受體較少，曾局限的認為小鼠較適合用于α-2，3SA受體結(jié)合的病毒研究，后有研究發(fā)現(xiàn)受體特異性并不影響某些病毒對小鼠的致病力和復制能力。

制作流感病毒感染動物模型多應用SPF級雌性BALB/c小鼠，4-6周齡。

病毒株為H5N1 A/ Vietnam/1203/2004，小鼠經(jīng)過輕度麻醉后滴鼻感染病毒。小鼠感染后觀察14天，監(jiān)測體重變化率。感染后分時間段處死小鼠，每個時間點收集相同數(shù)量小鼠肺、脾、腦、心等組織，進行病毒滴度測定和組織病理學檢查。

禽流感依據(jù)其對禽類的致病能力大小可以分為三個程度：高致病性、低致病性和無致病性。其中高致病性禽流感包括H5和H7 兩個亞型。但并非所有的H5 和H7 都是強毒株。人高致病性禽流感是由高致病性禽流感病毒某些亞型的毒株引起的人急性呼吸道傳染病。由H5N1亞型禽流感引起的癥狀較重，病死率高。1997年，香港一名3歲的男童因感染禽流感而死亡，在隨后的幾個月中，共有18個人感染禽流感病毒，其中6人死亡。之后相繼有 H9N2、H7N7 亞型禽流感感染人類和 H5N1 亞型再次感染人類的報道,禽流感與人禽流感的關(guān)系開始倍受關(guān)注。2003年12 月中旬開始至今,朝鮮、越南、泰國、韓國、日本和中國等10 余個亞洲國家先后暴發(fā)H5N1高致病性禽流感疫情, 并且再越南、泰國、柬埔寨以及印度尼西亞出現(xiàn)了人感染高致病性禽流感病毒病例。據(jù)最新資料報道，世界衛(wèi)生組織已證實泰國、越南和柬埔寨以及印度尼西亞自2004年1月起截至到2005年8月20日共有112人感染，其中導致57人死亡。而H7N7感染引起的癥狀相對較輕僅以眼角結(jié)膜炎和輕微的呼吸道癥狀為主。追溯歷史，有報道的第一次禽流感感染人的事件發(fā)生在上個世紀的70-80年代的幾例以自限性結(jié)膜炎為臨床特征的H7N7感染病患。最近的一次發(fā)生在2003年荷蘭一家農(nóng)場有近80名工人及家屬被確診為H7N7感染,他們以眼部感染和呼吸道癥狀為主,其中一名獸醫(yī)死亡,他的家人未接觸病禽但也被證實H7N7感染。這起事件具有有限的人傳人的證據(jù)。

禽流感病毒感染患者臨床表現(xiàn)及致病機制

H5N1禽流感病毒感染的潛伏期一般為2～4天，平均3天。發(fā)病前1天就開始排毒，排毒時間兒童比成人長，免疫抑制者排毒可長達一個多月。臨床表現(xiàn)為急性起病，早期表現(xiàn)類似一般流感。主要為發(fā)熱，體溫大多持續(xù)在38℃以上，熱程1～7天，一般為3～4天，可伴有流涕、鼻塞、咳嗽、咽痛、頭痛和渾身不適。少數(shù)患者可有惡心、腹瀉、稀水樣便等癥狀。重癥患者病情發(fā)展迅速，可出現(xiàn)肺炎、急性呼吸窘迫綜合征、肺出血、胸腔積液、全血細胞減少，腎功能衰竭，敗血癥、休克及Reye綜合征等多種并發(fā)癥。