1.該模型制備比較成熟，國內(nèi)外都有此模型，構(gòu)建和評(píng)價(jià)指標(biāo)一致，所以該模型應(yīng)用廣泛，具有統(tǒng)一的操作規(guī)程。

2. 該模型制備的關(guān)鍵：1）小鼠必須是重度免疫缺陷的，而且飼養(yǎng)環(huán)境必須潔凈；2）HIV操作需要生物安全。

3.此模型具有完善的人的免疫系統(tǒng)，HIV感染后，具有艾滋病病人相似的臨床癥狀，所以具有很高的比較醫(yī)學(xué)應(yīng)用價(jià)值。

1、1. SIVmac251靜脈感染恒河猴外周血病毒載量結(jié)果

8只SIVmac251靜脈感染恒河猴均在感染后7d檢出病毒載量陽性，之后迅速上升，在感染后14d達(dá)到高峰，峰值在107至108copies/mL之間，隨后迅速下降（圖1）。SIVmac251靜脈感染后42d到140d感染猴的血漿載量比較穩(wěn)定，1、2、3、4、9、11六只感染猴血漿病毒載量維持在105至107copies/mL之間；10號(hào)猴血漿病毒載量下降至105copies/mL以下；12號(hào)猴血漿病毒載量一直維持在較高水平，即107copies/mL以上。

圖1 SIVmac251靜脈感染中國恒河猴外周血病毒載量結(jié)果

Fig.1 Theviremia (viral RNA copies/ml plasma) in Chinese-original rhesus macaquesinfected intravenously with SIVmac251

1、 2. SIVmac251靜脈感染恒河猴CD4+/CD8+比值結(jié)果

8只感染猴CD4+/CD8+的比例在SIVmac251靜脈感染后持續(xù)下降，均于感染后14d出現(xiàn)倒置。2、4、10、11、12猴在感染后期一直維持在1以下的水平，其中，2、10、11三只猴維持在0.5上下波動(dòng)。1、3、9三只感染猴在SIVmac251靜脈感染后期CD4+/CD8+比值有些許反彈，在1.0上下波動(dòng)。（圖2）。

圖2 SIVmac251靜脈感染中國恒河猴外周血CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞比值

Fig.2 The changes of CD4+/CD8+ ratio of T lymphocytes in Chinese-original rhesus macaquesinfected intravenously with SIVmac251

3.SIVmac251靜脈感染恒河猴CD4+ T細(xì)胞絕對(duì)數(shù)

8只感染猴CD4+細(xì)胞絕對(duì)數(shù)在SIVmac251靜脈感染后迅速下降，隨后發(fā)生回彈，在感染后56d下降至最低，之后維持在穩(wěn)定水平（圖3）。12號(hào)猴的CD4+細(xì)胞絕對(duì)數(shù)在感染后231天下降至50個(gè)/μL，出現(xiàn)艾滋病癥狀，繼而死亡。4號(hào)猴的CD4+細(xì)胞絕對(duì)數(shù)在感染后259天下降至100個(gè)/μL以下；3號(hào)猴的CD4+細(xì)胞絕對(duì)數(shù)一直在800-1000個(gè)/μL上下浮動(dòng)。

圖3 SIVmac251靜脈感染中國恒河猴外周血CD4+T淋巴細(xì)胞絕對(duì)數(shù)

Fig.3 The CD4+T cell counts (per l blood) in Chinese-origin rhesus macaques infectedintravenously with SIVmac251

1、 實(shí)驗(yàn)用病毒：感染毒株為SIVmac251中國恒河猴細(xì)胞適應(yīng)株，中國恒河猴PBMCs滴定TCID50滴度為5×103 TCID50/mL。

2、 感染動(dòng)物：選用體重4-6kg的SPF恒河猴。實(shí)驗(yàn)前體檢無異常，必須排除猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴逆轉(zhuǎn)錄D型病毒(SRV-1，2，5)和猴T淋巴細(xì)胞性I型病毒(STLV-1)的感染。猴免疫缺陷病毒（SIV）易感性密切相關(guān)的4種基因（Mamu-A*01、Mamu-A*02、Mamu-B*08、Mamu-B*17）篩查結(jié)果為陰性。所有感染動(dòng)物必須在ABSL-3室中進(jìn)行。

3、 感染方法：將1 mL含有50 TCID50 的SIVmac251病毒經(jīng)后肢靜脈接種恒河猴。

4、 SIVmac251靜脈感染猴樣品采集和指標(biāo)測(cè)定：在感染前和感染后7、14、21、28、42、56、84、112、140、168、196、231、259、287天采集EDTA抗凝血4mL，分別測(cè)定血常規(guī)、血漿病毒載量、CD4+/CD8+、CD4+細(xì)胞絕對(duì)數(shù)。

5、 SIVmac251靜脈感染猴血漿病毒載量的測(cè)定：提取EDTA抗凝血漿中病毒RNA，使用SYBR Green I 實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR方法測(cè)定血漿病毒載量。

6、 SIVmac251靜脈感染猴外周血CD4+/CD8+比值及絕對(duì)數(shù)測(cè)定：CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-PE抗體標(biāo)記EDTA抗凝全血淋巴細(xì)胞，流式細(xì)胞儀測(cè)定CD4+/CD8+比值，并根據(jù)血常規(guī)結(jié)果，計(jì)算出CD4+T細(xì)胞絕對(duì)數(shù)。

文獻(xiàn)來源：Pulmonary Tuberculosis in Humanized Mice Infected with HIV-1

PMID:26908312

DOI：10.1038/srep21522