GD小鼠是由8個近交系小鼠，通過3代協同重組雜交，再經20代近交傳代，獲得的重組近交系。相比8個原始親本，GD小鼠擁有豐富的遺傳型和表型，可用于多基因連鎖分析和新的疾病模型鑒定。

本模型不涉及除遺傳物質重組對環境生態影響以外的其它安全性問題，本模型小鼠的保存、使用和處理均按照研究所倫理和安全委員會的要求執行，可以確保不產生安全性問題。

1、基因鑒定信息

2 、免疫熒光染色

敲除腸上皮STAT5基因導致腸道干細胞減少

Western結果顯示STAT5基因敲除導致腸道干細胞減少

通過FACS分析敲除STAT5基因后干細胞數目明顯減少，細胞增殖減少，模型建立成功。

實驗動物：Stat5 flox小鼠，Villin-CreERT2小鼠

試劑：tamoxifen(50mg/kg)，4%PFA

儀器：冰凍切片機，leica DMI8活細胞項目合作單位

實驗操作規程：將Stat5 flox小鼠與Villin-CreERT2小鼠雜交，在小鼠4周齡時，提取雜交小鼠鼠尾DNA，通過凝膠電泳檢測小鼠基因型。STAT5基因PCR引物序列如下1. GAA AGC ATG AAA GGG TTG GAG 2.AGC AGC AAC CAG AGG ACT AC 3.AAG TTA TCT CGA GTT AGT CAG G,Villin-CreERT2基因PCR引物序列如下:1 GTG TGG GAC AGA CAA ACC 2.ACATCT TCA GGT TCT GCG GG。選取雙陽性小鼠，6~8周齡，體重20~22g。按每只小鼠連續5天按50mg/ kg腹腔注射他莫西芬。誘導后CO2麻醉處死小鼠，取腸道組織，用冷PBS沖洗腸道組織，置于4%多聚甲醛中固定過夜，1×PBS溶液里浸泡5min。制作冰凍切片及石蠟切片，免疫組化及免疫熒光染色觀察腸道干細胞的變化。

1. STAT基因（細胞/基因/病原/其他造模因素）信息

STAT(信號轉換器和轉錄激活因子)轉錄因子家族由STAT 1、3、4和5幾種蛋白質組成。Janus激酶(JAK)/STAT信號通路與多種癌癥如卵巢癌、橫紋肌肉瘤、骨肉瘤和結腸癌相關。配體結合啟動激活級聯反應，最終導致STAT蛋白的磷酸化。磷酸化使STATs從細胞質轉移到細胞核并具有轉錄活性。STAT蛋白的關鍵激活因子是干擾素、白細胞介素等細胞因子，以及轉化生長因子(TGF) b等生長因子或癌基因等。

Stat5是信號轉導和轉錄活化蛋白家族的重要成員，參與了Jak/Stat信號通路調控。Stat5能夠影響細胞的增值/分化、存活與凋亡，并且在乳腺癌發育、免疫應答干細胞自我更新調控、造血作用以及腫瘤的發生發展中具有重要作用。

2. 研究背景

在哺乳動物體內，小腸組織是自我更新速度最快的組織之一。整個小腸黏膜大概每3~5d更新一次，主要依賴于小腸干細胞的增殖與分化。研究證實Ascl2、Olfm4、Bmi-1、Hopx等為小腸干細胞的標志基因。在這些標記基因中，Lgr5被認為是最重要的。從功能上分析，Lgr5編碼G蛋白偶聯受體，在Wnt信號通路中起著重要的作用。從數量上看，Lgr5+干細胞增殖活躍，具有自我更新的潛能，在所有隱窩的底部均大量存在，以維持小腸上皮的穩態。細胞因子- stat5信號通路調控可以調控腸上皮的穩態和損傷反應。我們通過特異性敲除腸道上皮細胞中的STAT5轉錄因子將STAT5信號通路與IESC的增殖分化聯系起來。